一种菜籽抗氧化肽的分离纯化方法步骤

菜籽肽多数是一些相对分子质量小于5000Da的小肽，必须采用膜分离、色谱分离等现代分离技术才会达到较好的分离纯化的目的。目前分离菜籽肽的方法主要有膜分离技术、凝胶过滤色谱、RP-HPLC和联用技术。凝胶过滤色谱是选择多孔凝胶为固定相，利用流动相中各组分相对分子量不同而达到物质分离的一种方法。凝胶层析中的凝胶起着分子筛的作用，所以又被称为分子筛层析或排阻层析，其突出优点是所用的凝胶属于惰性载体，不带电荷，吸附力弱，操作条件较温和，可在相当广的温度范围下进行，不需要有机溶剂，并且对分离成分的理化性质的保持有独到之处。Harman的自由基理论提出人体内氧化产生的自由基与人的衰老和许多疾病有关。自由基是指任何能独立存在的，有一个或多个未配对价电子的原子或原子基团。自由基非常活泼、极不稳定，易与其它物质发生反应形成新的自由基或氧化物。蛋白质水解成肽后，具有抗氧化作用的基团充分暴露出来，能够更好的发挥抗氧化作用。肽类不仅在油溶体系中具有较好的增效作用，还可以在水溶性体系、乳化体系及干燥体系中也具有较高的抗氧化活性。菜籽源抗氧化活性肽是由菜籽蛋白水解得到的一种肽，其抗氧化作用机理目前没有完全清楚，有研究认为其可能富含供氢体，具有提供氢质子的能力，可使具有高度氧化性的自由基还原，从而能终止自由基连锁反应，起到清除或抑制自由基的目的。还有研究认为同为质子供体，肽的抗氧化能力要强于游离氨基酸和蛋白质，所以肽的抗氧化活性还被认为与其氨基酸序列及空间构象有关。

华炬新产品研究所技术咨询委员会科研人员现推荐一项一种菜籽抗氧化肽的分离纯化方法步骤，该技术的有益效果是：与现有的技术相比，对酶解菜籽蛋白联合膜分离和Sephacryl S-100HR凝胶柱分离两种纯化手段，并通过控制凝胶过滤的上样浓度、体积、洗脱流速、洗脱液、柱高五个条件以层析分离度来判断合适的分离条件；结合过氧自由基清除能力的测定抗氧化能力的方法，快速简便准确地测得各组分的抗氧化性，得到抗氧化多肽。另外多肽样品是采用酶法水解蛋白质，此方法不仅能最大限度地保留原料的营养成分，改善其加工特性，而且最重要的是能从酶解产物中分离出一些具有生理活性的生物活性肽，现将该一种菜籽抗氧化肽的分离纯化方法步骤及实施例介绍如下供研究交流参考：（211241  231456） 

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